目的：研究病原微生物检验中应用分子生物学技术的价值。方法：研究年限区间为2021年2月-2022年2月，择取样本为85例行病原微生物检验患者，采集病原微生物样本并均行常规RT-PCR检验、实时荧光RT-PCR检验，对比分析检验结果。结果：常规RT-PCR检验阳性检出率为（48/85）56.5%，实时荧光RT-PCR检验阳性检出率为（69/85）81.2%，实时荧光RT-PCR检验阳性检出率显著高于常规RT-PCR阳性检出率（P＜0.05）。结论：病原微生物检验中应用分子生物学技术价值突出，采用实时荧光RT-PCR检验可提高阳性检出率，值得全面推广应用。