为探究大黄鱼自噬相关基因5(LcATG5)在病毒感染中免疫应答中的作用，本实验从大黄鱼中克隆得到了自噬相关基因ATG5(LcATG5)，其开放阅读框(ORF)全长828个核苷酸，编码275个氨基酸的蛋白质，预测的分子量为32.3 ku，等电点为5.7。氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示，LcATG5与其他物种ATG5之间的序列一致性较高，含有1个高度保守的APG5结构域，并且与棘头梅童鱼ATG5的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示，LcATG5在所检测的11个组织或器官中均有表达，在血液中表达量最高，在脾脏中表达量最低；LcATG5在来源于大黄鱼头肾组织的原代粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞以及细胞系LYCK细胞中也均有表达，在原代粒细胞中表达量相对较高，而在巨噬细胞中相对较低；病毒类似物poly(I:C)刺激后，这4种免疫细胞中LcATG5的表达水平都显著上调，其在LYCK细胞中变化最为显著，刺激后12 h上调了3.93倍。过表达LcATG5的鲤上皮瘤(epithelioma papulosum cyprini，EPC)细胞受鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus， SVCV)感染48 h后，细胞病变效应(cytopathic effects，CPE)明显高于对照组，细胞培养上清中SVCV的滴度为1013.82 TCID50/mL，高于对照组109.27 TCID50/mL，同时细胞内SVCV标志基因SVCV-G、SVCV-M和SVCV-P的表达量分别上调了13.77倍、15.72倍和11.39倍，表明LcATG5过表达促进了EPC细胞中SVCV病毒增殖，上述结果为深入研究自噬和自噬相关基因在鱼类病毒感染过程中的作用及机制奠定了基础。

Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)基因片段S11编码外衣壳蛋白VP35。为深入探究VP35蛋白在病毒增殖中发挥的作用，实验扩增了S11基因并插入载体pCMV-3×flag中，构建pCMV-3×flag-S11真核表达质粒，转染草鱼肾细胞(CIK)后感染Ⅱ型GCRV，收集感染后的上清液与细胞。首先利用实时荧光定量PCR中相对定量的方法检测细胞样品中Ⅱ型GCRV-S6基因的mRNA。结果显示，过表达VP35在病毒mRNA水平促进Ⅱ型GCRV的增殖；然后扩增S6基因并插入到载体pET-32a(+)中，构建重组原核表达质粒，纯化Ⅱ型GCRV-VP4蛋白并制备多克隆抗体，用Western blot检测收集的细胞样品中的VP4蛋白，结果表明过表达VP35在病毒蛋白水平促进Ⅱ型GCRV的增殖；最后使用pET-32a-S6质粒作为阳性标准质粒并制作标准曲线，建立Ⅱ型GCRV病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法，利用该方法检测细胞上清液中的病毒颗粒，结果表明过表达VP35增加Ⅱ型GCRV病毒拷贝数。本研究从3个维度证明过表达VP35蛋白促进Ⅱ型GCRV增殖，有助于深入解析VP35蛋白功能，也为进一步探究Ⅱ型GCRV的致病机制提供理论基础。

为了研究淋巴因子基因(T-cell acute lymphocytic leukemia，tal)在香港牡蛎中的免疫功能，实验采用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends，RACE)克隆了香港牡蛎tal的cDNA全长序列，命名为Chtal，该基因全长812bp，其中5非编码区17bp，3非编码区135bp，开放阅读框(open reading frame，ORF)660bp，编码219个氨基酸，相对分子质量25.11ku，理论等电点5.80。多序列比对和系统进化树结果显示，Chtal与长牡蛎、美洲牡蛎和海蜗牛tal同源性较高，证明了该基因是软体动物tal家族的一个成员。荧光定量PCR结果显示，Chtal在香港牡蛎血淋巴细胞中表达量最高，其次是心脏、鳃和消化腺。在溶藻弧菌和溶血性葡萄球菌刺激后，Chtal表达量显著上调，分别在24和12h达到最高水平，随着时间的增加该基因的表达量逐渐下降。亚细胞定位结果显示，Chtal在细胞核中表达。活体注射重组TAL蛋白能够显著提高淋巴细胞的数量，通过Edu增殖实验进一步证实了tal具有促进香港牡蛎血淋巴细胞再生的功能。本研究初步揭示了香港牡蛎tal参与了淋巴细胞再生，为深入研究该基因在牡蛎抗病中的功能提供了依据。

枯燥的知识点形象生动化能促进学生有效学习，抓住考试重点逐一突破能促进学生有效学习，学生感兴趣的活跃课堂能促进学生有效学习，以模型与建模为载体的教学课堂模式正是能满足以上三点。“模型与建模”这种核心素养的形成能把学生的理性思维与形象思维紧密的结合在一起，使知识点更生动，近几年的真题中出现对于各种模型以及建模，学生形成“模型与建模”的核心素养势在必行，以模型为轴插穿各种教学模式，使课堂多样化，让学生主动参与到课堂中，激发学生的求知欲，促进学生有效学习。

目的：本次实验将采用康柏西普眼用注射液辅助玻璃体切除术对进展型增殖期糖尿病性视网膜病变患者开展治疗，分析临床应用价值。方法：本次实验选取了2019年1月-2019年6月前来本院进行疾病检查及治疗的患者为对象，经过专业的科室检查，其属于进展型增殖期糖尿病性视网膜病变，并需要开展对症治疗。在自愿参与实验调查的患者中进行随机分组，对60例患者进行病情结果讨论。对照组患者采用玻璃体切除术治疗，观察组则为康柏西普眼用注射液辅助玻璃体切除术，分析应用成果。结果：从治疗上看，观察组患者治疗后的血管内皮生长因子的水平明显改善，在治疗后第六周为（142.63±31.05）pg/ml，对照组为（158.55±29.36）pg/ml，组间对比差异较为显著，具有统计学意义（P＜0.05）。与此同时，在视力状况调查上，观察组患者改善效果优于对照组，治疗效果显著。结论：采用康柏西普眼用注射液辅助玻璃体切除术能够更好地为患者的病情提供改善治疗，有助于视力提升，降低眼内血管内皮生长因子水平，可以推广应用。