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草鱼血红蛋白通过诱导头肾巨噬细胞表达的炎症因子激活免疫反应 下载：70 浏览：475

秦真东 詹凡玢 李亚男 施斐 杨敏璇 卢志杰 李军 林蠡 《水产研究进展》 2023年5期

摘要:
为了探究鱼类体内过量游离血红蛋白对鱼体的影响，本实验以草鱼为研究对象，通过体内注射血红蛋白模拟体内出血，探究血红蛋白对组织和组织中巨噬细胞的免疫调控作用。体内注射血红蛋白的实验结果显示，血红蛋白的刺激导致头肾和中肾组织中出现明显的血红蛋白沉淀，同时提高了鱼体血清中的抗氧化相关酶活性，促进了头肾组织中炎症因子基因TNF-α、IL-1β和IL-10的mRNA表达水平。普鲁士蓝和间接免疫荧光实验结果显示，头肾巨噬细胞对血红蛋白表现出了吞噬活性。荧光定量PCR检测结果显示，血红蛋白的刺激显著激活了头肾巨噬细胞中CD68、CD86、CSF和MHC-Ⅱ的mRNA表达水平。进一步的细胞因子检测结果显示，血红蛋白刺激12h后，头肾巨噬细胞中的炎症因子基因(TNF-α、IL-1β和IL-4)、趋化因子基因(CCL20和CCL4)、IFN-α和TLR4的mRNA表达水平被显著上调表达。研究表明，草鱼头肾巨噬细胞对血红蛋白具有吞噬能力，同时血红蛋白也激活了巨噬细胞中多种细胞因子的表达。本研究结果首次阐述了草鱼血红蛋白与巨噬细胞的相互作用关系，丰富了鱼类血液基础免疫学理论，同时也为鱼类健康养殖提供了新的参考。

南极磷虾主要过敏原的分离纯化及性质研究 下载：78 浏览：462

林娜1 马德蓉1，2 刘志东1 倪玲1 段蕊2 张俊杰2 《水产研究进展》 2022年5期

摘要:
为了探究南极磷虾致敏问题，从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原，并对过敏原的性质进行研究，实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白；采用SDS-PAGE和Western blot(WB)筛选南极磷虾过敏原；使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过敏蛋白；通过等电点沉淀、硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析分离纯化过敏原；采用SDS-PAGE及WB分析南极磷虾主要过敏原的耐热性及对模拟胃肠液的消化稳定性。结果显示，南极磷虾肌浆蛋白(SP)和肌原纤维蛋白(MF)电泳条带丰富且分子量范围广。南极磷虾蛋白与虾蟹过敏患者血清能发生免疫反应，其中至少有4个蛋白条带发生了阳性反应；免疫反应最强烈的蛋白分子量约为35ku，能够被所有的患者血清识别，经液质联用鉴定此过敏蛋白为南极磷虾原肌球蛋白(TM)。硫酸铵分级盐析纯化TM的最佳饱和度为50%；分离纯化后得到了纯度较高的TM，其等电点为4.4，热稳定性好，能与虾蟹过敏患者血清发生强烈的免疫反应。TM随着模拟胃液消化时间的延长，主条带分子量逐渐降低，最后稳定在33ku左右，并且分子量为15和12ku的降解片段含量逐渐增多且稳定存在；这些降解条带仍然能与过敏患者血清发生较强的免疫反应。随着模拟肠液消化时间的延长，TM原始片段逐渐减少直至消失，最后完全降解成分子量更小的多肽；TM经肠液消化后其降解产物免疫活性大大降低。研究表明，南极磷虾中存在过敏原，TM是其最主要的过敏原，且具有免疫反应性。TM还具备了过敏原的一般特性，比如耐高温、耐胃蛋白酶消化、对胰蛋白酶消化部分稳定。研究结果对于阐明南极磷虾潜在致敏问题的预警和防控具有现实意义，也为南极磷虾加工利用及过敏原消减技术构建提供基础信息。

低鱼粉饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾生长性能、肠道形态和免疫反应的影响 下载：51 浏览：275

龚舜莲 冯森儿 张昕晨 谢诗玮 《中国水产学报》 2023年3期

摘要:
为研究低鱼粉饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长性能和免疫机能的影响，取平均体质量为0.43g的健康虾苗360尾进行试验，将虾苗随机分成3个组，每组设置4个重复，分别投喂高鱼粉饲料(HF,鱼粉质量分数为25%,对照组)、低鱼粉饲料(LF,以植物蛋白为基础的混合蛋白替代15%的鱼粉蛋白)和添加质量分数为0.02%植酸酶(5 000U/g)的低鱼粉饲料(LFP),养殖试验共进行8周，试验结束后测定对虾的生长性能、抗氧化能力、肠道形态及非特异性免疫指标。结果表明：LF组对虾的各项生长指标最差，低鱼粉饲料中添加植酸酶后，LFP组对虾的增重率、特定生长率、饲料效率和消化率均显著提高(P<0.05),存活率也有所提升；LF组的肠道皱襞高度和肌层厚度最低(P<0.05),添加植酸酶后这两个指标显著提升(P<0.05),并接近或达到高鱼粉组水平(P>0.05);LF组肝胰腺中的过氧化氢酶(CAT)活力和谷胱甘肽(GSH)含量显著降低(P<0.05),低鱼粉饲料中添加植酸酶后这两个指标有所提升并接近高鱼粉组水平(P>0.05);低鱼粉饲料中添加植酸酶后，对虾肝胰腺糜蛋白酶基因chymotrypsin表达水平显著提高(P<0.05)。研究表明，本试验条件下，在以植物蛋白源为基础的低鱼粉饲料中添加植酸酶，能够显著提高凡纳滨对虾对营养物质的利用率，增强对虾抗氧化能力和非特异性免疫能力，在一定程度上缓解低鱼粉饲料对肠道的损伤，进而提高凡纳滨对虾生长性能和饲料利用率。

草鱼miR-23a在嗜水气单胞菌感染过程中的调控机制 下载：79 浏览：453

包天杰1 鲍生成1 樊坤1 沈玉帮1，2，3 徐晓雁1，2，3 李家乐1，2，3 《水产研究进展》 2022年3期

摘要:
为探索嗜水气单胞菌感染后草鱼肾脏细胞(Ctenopharyngodon idella kidney， CIK)中miR-23a的调控机制，实验通过实时荧光定量PCR (qPCR)测定了嗜水气单胞菌感染CIK细胞后miR-23a的表达量变化，使用RNAhybrid软件预测miR-23a的靶基因并用双萤光素酶报告基因检测系统进行鉴定，最后分析miR-23a对靶基因及下游基因的调控作用。研究发现，在嗜水气单胞菌感染CIK细胞不同时间点，miR-23a表达量产生显著变化；双荧光素酶报告基因实验和miRNA-23a模拟物/抑制剂转染实验对靶基因反向调控，鉴定出tbk1和glut1是miR-23a靶基因；过表达miR-23a抑制了下游基因ldha、ldhba、pdha1a和pdha1b的表达水平。实验结果揭示，miR-23a参与调控嗜水气单胞菌感染后CIK细胞中的免疫应答。tbk1和glut1是miR-23a靶基因，miR-23a能够靶向glut1影响下游基因的表达。以上结果为miR-23a在硬骨鱼类中免疫反应调控研究方面提供了的重要思路，同时为进一步了解miRNA介导多个靶基因调节鱼类先天性免疫提供了更多理论依据。

2017—2018年长海县浮筏养殖虾夷扇贝生长和存活差异分析 下载：67 浏览：301

周凯 刘超 孔宁衣 启麟 杨传燕 《中国水产学报》 2022年5期

摘要:
为揭示环境因子与虾夷扇贝能量代谢及免疫防御能力的关系，分别于2017年和2018年的同期(3、5、6、7月)对长海县浮筏养殖虾夷扇贝进行4次调查取样，对虾夷扇贝的壳长、体质量、肥满度、存活率和患病率等生长相关指标的年际差异及其影响因子进行了研究。结果表明：2018年长海县养殖海区水温在3、6、7月显著低于2017年同期(P<0.05),溶解氧含量在3、6、7月则显著高于2017年同期(P<0.05);2018年虾夷扇贝6、7月的壳长、7月的体质量、5—7月的肥满度均显著高于2017年同期(P<0.05);2018年虾夷扇贝3、6月的闭壳肌糖原含量，5—6月、6—7月的存活率均显著高于2017年同期(P<0.05);2018年虾夷扇贝3、6、7月的闭壳肌SOD活性，5、6月的闭壳肌MDA含量，3、5、6月闭壳肌的HSP70含量，以及5—6月、6—7月的患病率均显著低于2017年同期(P<0.05)。研究表明，在适宜的环境条件下，扇贝的免疫反应强度降低，闭壳肌积累了更多的糖原，从而为其他生理活动提供更充足的能量储备，促进浮筏养殖虾夷扇贝的健康生长，进而降低患病率，提高存活率。该研究结果将为长海县和其他相似海区浮筏养殖虾夷扇贝的病害预警预报及健康养殖提供数据支撑和理论基础。
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