为了研究干酪乳杆菌发酵人参茎叶提取物对锦鲫的免疫及抗氧化功能的影响，实验先用3%、4%、5%、6%(记为L3、L4、L5、L6)的干酪乳杆菌菌液发酵人参茎叶提取物，再分别添加到基础饲料(记为L0)中，对初始平均体重为(25.00±0.05) g的锦鲫进行为期5周的饲喂实验。周期性取样，采集锦鲫血清、肝胰脏、中肾、脾脏和全肠，以检测相关免疫指标的变化。在饲喂实验结束后进行嗜水气单胞菌攻毒保护性实验。结果显示，与L0组相比，L5组碱性磷酸酶(AKP)、免疫球蛋白M (IgM）、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量显著升高，L5组丙二醛(MDA)含量显著低于L0组。各组织中IL-10、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-1β基因表达水平均有不同程度的升高，表现出时空差异，其中IL-10的基因水平表达升高更为敏感。在攻毒保护性实验中，L5组的存活率达到30%，相较于其他组而言存活率最高。研究表明，本实验条件下，当干酪乳杆菌的接种量为5%时，人参茎叶提取物发酵对锦鲫的应用效果最好，能够提高锦鲫抗氧化能力及免疫相关基因的表达，并对降低嗜水气单胞菌的感染有较好的预防作用。

为探明嗜水气单胞菌QseB在病原菌对鱼体应激激素去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)的识别和响应过程中的作用，实验采用同源重组方法构建了嗜水气单胞菌NJ-35的qseB缺失突变株(ΔqseB)，比较分析了NE诱导后，野生株和突变株之间其生物膜形成能力、溶血活性和运动能力等与细菌毒力有关的生物学功能的变化，以及对鱼体致病力的变化。结果显示，qseB的缺失显著降低了NE对嗜水气单胞菌的生长、生物膜形成、溶血活性的促进作用，减弱了嗜水气单胞菌对奥利亚罗非鱼的致死率，而对细菌运动能力和脂肪酶活性无显著影响。研究表明，NE对嗜水气单胞菌NJ-35生物膜形成和溶血活性的增强作用可能依赖于QseB，表明QseB在病原菌与宿主相互作用中发挥着重要作用。本研究进一步揭示了嗜水气单胞菌的致病机理，并为细菌与宿主相互作用的研究提供了新的理论基础。

为探索嗜水气单胞菌感染后草鱼肾脏细胞(Ctenopharyngodon idella kidney， CIK)中miR-23a的调控机制，实验通过实时荧光定量PCR (qPCR)测定了嗜水气单胞菌感染CIK细胞后miR-23a的表达量变化，使用RNAhybrid软件预测miR-23a的靶基因并用双萤光素酶报告基因检测系统进行鉴定，最后分析miR-23a对靶基因及下游基因的调控作用。研究发现，在嗜水气单胞菌感染CIK细胞不同时间点，miR-23a表达量产生显著变化；双荧光素酶报告基因实验和miRNA-23a模拟物/抑制剂转染实验对靶基因反向调控，鉴定出tbk1和glut1是miR-23a靶基因；过表达miR-23a抑制了下游基因ldha、ldhba、pdha1a和pdha1b的表达水平。实验结果揭示，miR-23a参与调控嗜水气单胞菌感染后CIK细胞中的免疫应答。tbk1和glut1是miR-23a靶基因，miR-23a能够靶向glut1影响下游基因的表达。以上结果为miR-23a在硬骨鱼类中免疫反应调控研究方面提供了的重要思路，同时为进一步了解miRNA介导多个靶基因调节鱼类先天性免疫提供了更多理论依据。

为构建嗜水气单胞菌ompA和flaA基因重组干酪乳杆菌并分别检测其表达产物对鲤生长及免疫效果的影响，实验将目的基因克隆至乳酸菌穿梭表达质粒pPG612中，并电转至干酪乳杆菌中，经诱导后包被饲料对鲤进行饲养56d，称重并采集血清及组织，分析生长指标及免疫指标变化。在56d饲养免疫结束后结果显示，生长指标显示重组干酪乳杆菌组与对照组无显著差异，表明重组干酪乳杆菌对生长无影响；免疫效果分析显示，血清中IgM表达水平显著上升。血清中AKP、LZM、SOD、CAT、C3和C4也均显著升高。荧光定量PCR检测发现，免疫后肝脏、脾脏、头肾及肠组织中的细胞免疫因子基因IL-1β、IL-8、TNF-α、NF-κB、TLR5及MYD88的表达水平有不同程度的显著提升；其中TLR5及MYD88表达量在Lc-mcs-flaA组高于Lc-mcs-ompA组。攻毒后Lc-mcs-ompA与Lc-mcs-flaA组免疫保护率分别为59%与54%，显著高于对照组。研究表明，本实验构建的重组干酪乳杆菌Lc-mcs-ompA与Lc-mcs-flaA免疫鲤能刺激机体产生免疫应答反应，进而提高自身存活率，为预防鱼类嗜水气单胞菌感染的口服免疫制剂的研发奠定基础并提供科学理论依据。

为确定黑斑蛙蝌蚪出血病的病原菌并筛选出防治该病的药物，本研究从患出血病蝌蚪体内分离出菌株KD-CXB-1，健康蝌蚪在人工感染该菌后出现与自然感染蝌蚪相似的出血症状。同时从人工感染死亡蝌蚪体内分离到与菌株KD-CXB-1形态特征及生理生化特性一致的优势菌株，以上结果表明KD-CXB-1为黑斑蛙蝌蚪出血病的病原菌。实验进一步对菌株KD-CXB-1开展形态学观察、革兰氏染色、生理生化指标测定、16S rDNA基因序列测定、系统发育树构建、药物敏感性测定。形态学观察显示该菌为杆状的革兰氏阴性菌，长度约1μm，表面粗糙。通过16S rDNA基因序列比对、系统发育树构建、生理生化实验确定KD-CXB-1为嗜水气单胞菌。药物敏感性实验结果表明，KD-CXB-1对氟苯尼考、丁香和苏木等10种药物高度敏感；对乌梅、五倍子和黄芩等3种药物中度敏感；对阿莫西林、大黄和青霉素等8种药物不敏感。研究表明，嗜水气单胞菌是引起黑斑蛙蝌蚪出血病的病原菌，筛选出的10种高敏感药物为有效防治蝌蚪出血病提供了理论参考和实践依据。

为调查鱼源气单胞菌毒力基因与其致病力的相关性，以2009—2018年从不同患病鱼分离的173株气单胞菌为研究对象，通过检测毒力相关基因、测定溶血活性、腹腔注射感染异育银鲫等方法开展评价。通过管家基因gyrB分子鉴定结果显示，173株气单胞菌中维氏气单胞菌(119/173，68.9%)和嗜水气单胞菌(50/173，28.9%)是主要流行的菌株。10个毒力基因aer(162/173，93.64%)、act(131/173，75.72%)、ast(55/173，31.79%)、alt(58/173，33.53%)、lip(152/173，87.86%)、exu(154/173，89.02%)、fla(143/173，82.66%)、gcaT(148/173，85.55%)、 eprCAI(41/173，23.70%)和ahyB(51/173，29.48%)普遍存在于173株气单胞菌中。依据检测到的毒力基因数量从多到少分布情况，这些菌株可分为7大类(Ⅰ～Ⅶ)53个毒力基因型。大部分嗜水气单胞菌检测到8～10个毒力基因，主要分布于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ类基因型；维氏气单胞菌的eprCAI、ahyB、ast和alt等4个毒力基因检测率低，主要分布于Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ类基因型。大部分气单胞菌(94.22%，163/173)具有溶血活性。代表性毒力基因型的38株维氏气单胞菌和20株嗜水气单胞菌腹腔注射异育银鲫攻毒结果显示，3.0×106 CFU/尾的剂量下，3株维氏气单胞菌使鲫死亡率达80%～100%，16株嗜水气单胞菌使鲫死亡率达90%～100%。研究表明，维氏气单胞菌是目前最主要流行的气单胞菌，但其检测到的毒力基因普遍少于嗜水气单胞菌，且对异育银鲫的致病力普遍弱于嗜水气单胞菌。本研究能够为气单胞菌败血症的流行病学调查和疫苗研究提供理论依据。

为诊断中华草龟Chinemys reevesiis腹甲腐皮裂甲病,于江西省南昌市某养龟场采集种龟池患病和濒死的中华草龟种龟11只(编号为1～11号),采用病原菌分离纯化、生理生化试验、疑似病原菌人工回感试验、病原菌药敏试验、组织病理检验等方法进行了病因分析及鉴定。结果表明:该病典型的临床症状为腹甲角质层干裂、骨质层发黑,病龟精神状态均表现呆滞、不爱爬动;病理解剖显示,患病龟肝脏发黑,肺发白,胃肠道无内容物、有腹水,内脏团伴有恶臭味;组织病理观察显示,多数病龟密质骨发生裂解坏死,骨髓腔浸润大量嗜酸性粒细胞,同时内脏组织有炎症特征;进一步从病龟腹甲、肝脏、肺组织分离获得5株菌株,经细菌形态学观察、生理生化试验、16S rDNA基因序列及系统发育分析等鉴定为嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila;人工回感染试验显示,感染龟与自然发病龟的临床症状一致,且在回感中华草龟脏器中再分离到相同的菌株;药敏试验显示,该菌对头孢类、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、喹诺酮类抗菌药物高度敏感,对青霉素类、四环素抗菌类药物有耐药性。研究表明,中华草龟腐皮裂甲病的病原菌是嗜水气单胞菌,头孢类、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、喹诺酮类等抗菌药物可作为该病临床防治的首选药品。