文章-世纪中文出版社

张立成1,2 杨敬林3 王璟3 黄蔚3 杨胜3 胡德勇3 《中国土壤》 2018年10期

摘要:

利用湖南省安仁县渡口乡的长期定位试验平台（建于1985年4月）,研究稻-稻-油菜轮作土壤中芽胞杆菌丰度变化以及对作物产生促生长作用的解磷菌和解钾菌的影响。试验于2015年7月、2015年10月和2016年4月从试验点采集土壤样品、测定芽胞杆菌丰度、分离解磷和解钾菌株并进行种属鉴定和能力测试。通过荧光定量PCR分析,发现稻-稻-油菜轮作土壤中芽胞杆菌的数量较稻-稻连作土壤高24%36%。通过Blast在线比对,发现轮作和连作土壤中解磷和解钾菌属类存在不同,但优势菌类均为芽胞杆菌。通过解磷和解钾量大小分析,发现分离自轮作土壤和连作土壤的菌株之间并无显著差异。结果表明,与稻-稻连作相比,稻-稻-油菜轮作能够提高土壤中芽胞杆菌的丰度,且影响解磷菌和解钾菌的种类。

胃癌组织中Notch1、Jagged1、Hes1的表达及临床意义下载：55 浏览：388

王春斐1 桂忠娜2 田强1 曲红梅1 宗蕾1 李登欣1 《肿瘤研究》 2018年5期

摘要:

[目的]探讨胃癌组织及其相应癌旁组织中Notch1及其配体Jagged1、下游信号Hes1的表达情况，并分析其临床意义。[方法 ]采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测胃癌组织及其相应的癌旁组织(距癌组织>5cm)中Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA的表达，免疫组织化学染色法检测Notch1、Jagged1、Hes1蛋白的表达，并分析三种蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系。[结果]免疫组织化学染色、qRT-PCR结果均显示Notch1、Jagged1在癌旁组织中的表达高于胃癌组织(P<0.05)，Hes1在癌旁组织中的表达低于胃癌组织(P<0.05)。Notch1、Jagged1、Hes1的表达与肿瘤脉管浸润、分化程度、浸润深度相关(P<0.05)，而与年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。胃癌组织中Notch1与Jagged1的表达呈正相关(r=0.032，P<0.05)，而Jagged1与Hes1的表达呈负相关(r=-0.862，P<0.001)。[结论 ]Notch信号通路中Notch1受体及其配体Jagged1在胃癌组织中低表达，Hes1在胃癌组织中高表达，提示Notch1、Jagged1、Hes1的表达有望为胃癌诊断提供理论依据。还原

发育期火龙果内参基因的筛选和验证下载：86 浏览：481

崇慧影文晓鹏《生物技术研究》 2019年2期

摘要:

筛选火龙果果实发育期稳定表达的内参基因。[方法]以火龙果不同发育时期的果实为材料,利用qRT-PCR技术检测17个看家基因的表达水平,借助ge Norm和Norm Finder筛选出果实发育期理想的内参基因。[结果]Ge Norm评估YLS8和ACT并列排名第一,表达稳定值均为0. 221,配对差异值V2/3为0. 105; Norm Finder排名前两名为TBP2和YLS8,表达稳定值为0. 160和0. 191。使用内参基因YLS8和TBP2分析火龙果甜菜色素合成途径关键基因HpCytP450-like1的表达水平,与基因Hp Cyt P450-like1在火龙果果实发育期表达趋势一致。[结论]从17个候选基因中筛选出2个理想的的内参基因YLS8和TBP2,可作为火龙果果实发育期相关基因的表达调控研究。

果胶酶基因剂量效应与水解果胶的工艺研究下载：84 浏览：510

彭小波杨江科陈光军《生物技术研究》 2018年5期

摘要:

实现烟曲霉果胶酶AFPG基因在毕赤酵母表达并获得高产菌株;阐述果胶酶AFPG的基因剂量效应;探究果胶的水解工艺。[方法]采用PCR技术从烟曲霉扩增AFPG基因并克隆到p AO815载体;用同尾酶构建多拷贝串联表达盒,经线性化的质粒电转到毕赤酵母构建重组工程菌;采用实时荧光定量PCR检测AFPG基因拷贝数;用薄层层析(TLC)技术对果胶的酶解产物进行分析。[结果]SDS PAGE分析表明AFPG基因表达了一个约40 kDa的蛋白;拷贝数为2、3、5的重组子摇瓶发酵,蛋白含量分别为0.24 mg/mL、0.28 mg/mL、0.35 mg/mL;14 L高密度发酵比活为8783 U/mg;该酶最适温度和pH为70℃和5.0;在底物浓度0.7%(W/V),酶量20 U,水解果胶30 min,转化率达到12%。[结论]果胶酶AFPG的表达存在基因剂量效应,5拷贝是2拷贝表达量的1.5倍,可通过构建多拷贝获得高产菌株。果胶酶解效果明显,水解工艺研究为果胶酶的应用奠定基础。

KAP1在食管鳞癌中的表达及意义下载：61 浏览：414

刘博1 郭莉2 田剑2 刘军超1 李志军2 李凤玉2 《预防医学杂志》 2020年7期

摘要:

目的研究KRAB相关蛋白1(KAP1)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及意义。方法选取手术切除的原发性ESCC136例、高级别上皮瘤变(HGIN)35例、低级别上皮瘤变(LGIN)29例和距肿瘤边缘5cm以上的正常食管黏膜组织(NEE)37例,采用免疫组化SP法对以上各组织中KAP1蛋白的表达情况进行检测,分析其与ESCC肿瘤发生发展及患者预后的相关性;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对20例匹配的ESCC和NEE组织中KAP1基因的表达进行检测。结果①KAP1蛋白的表达从NEE (24.3%)、LGIN(31.0%)、HGIN(45.7%)及ESCC(55.9%)呈逐渐增高趋势,差异均具有统计学意义(P=0.002);②KAP1的异常表达与pTNM分期、浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05);③qRT-PCR结果显示,与配对的NEE组织相比,ESCC组织中KAP1的相对表达量明显升高(P<0.01);④136例ESCC患者的5年总体生存率为13.2%。ESCC患者的5年生存率与组织学分级、pTNM、浸润深度、淋巴结转移等具有相关性(P<0.05),KAP1的表达与ESCC患者的预后不相关。结论 KAP1的过表达在ESCC的发生、发展和转移中起重要作用,可作为理想的肿瘤标志物辅助ESCC诊断、指导临床治疗。

人腺病毒-B55实时荧光定量PCR扩增方法的建立下载：97 浏览：516

董磊1 刘娟2 艾现印3 马红雨1 全首祯1 姜涛4 《国际检验医学》 2019年7期

摘要:

目的构建人腺病毒(HAdV)-B55的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)扩增方法，并验证其检测性能。方法采用Beacon Designer 7软件设计针对HAdV-B55 Hexon基因序列的特异性引物，建立HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法，并评估其敏感性及特异性。结果建立了检测HAdV-B55的实时荧光定量PCR扩增方法，反应敏感性为0.08 PFU/反应体系，且特异性良好，与相关HAdV B组病毒均未检测到交叉反应。结论成功建立了针对我国HAdV-B55的特异性实时荧光定量PCR检测方法，为HAdV-B55的快速检测及防控提供了有力的支持。

实时荧光定量PCR快速检测脑膜炎奈瑟菌的临床价值下载：84 浏览：508

王崇义1 史训忠2 孙正林1 《国际检验医学》 2018年9期

摘要:

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)快速检测流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病原菌脑膜炎奈瑟菌(Nm)的临床价值。方法收集70例疑似流脑病例的双份脑脊液标本，1份采用细菌培养法进行检测，另1份采用实时荧光定量PCR进行检测，比较2种方法的检出阳性率以及敏感性和特异性。结果采用细菌培养法检出Nm阳性49例，阳性率为70.00%；实时荧光定量PCR检出Nm阳性67例，阳性率为95.71%，二者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测结果与细菌培养法阳性符合率为70.00%，其中有18例细菌培养法为阴性而实时荧光定量PCR为阳性。实时荧光定量PCR检测Nm的特异性为100%，无假阴性结果，阳性预测值为73.13%，阴性预测值为0.00%，检测下限为103拷贝/m L，线性范围为2×103～2×107拷贝/m L。结论实时荧光定量PCR检测Nm敏感性高、特异性强，且快速简便，为流脑流行病学调查提供了一种快速、简便的病原学诊断手段。

实时荧光定量PCR技术检测患儿手足口病病原体下载：288 浏览：2995

张悦李明爽(通讯作者) 《中国儿科杂志》 2021年6期

摘要:

手足口病患者通过实时荧光定量PCR技术进行检查病原体，从而对本地的病毒流行学特征进行了解，从而对手足口病进行防治。方法：我院在2019年2月到2020年2月，这一期间内，一共收治了60例疑似手足口病的患者，以患者的年龄作为分组依据，分别分为三岁以下组（n=37）和3-6岁组（n=23），通过实时荧光定量PCR技术进行检查患者标本中的肠道病毒通用型、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型，判断实时荧光定量PCR技术的检查准确性。结果：通过实时荧光定量PCR技术检查后，肠道病毒通用型的阳性率：76.7%（46/60），三岁以下组的检查阳性率为86.5%（32/37），3-6岁组的检查阳性率为60.9%（14/23），三岁以下组的检查阳性率高于3-6岁组，肠道病毒通用型的阳性率为66.7%（40/60），柯萨奇病毒A组16型的阳性率为18.3%（11/60）。结论：通过实时荧光定量PCR技术对手足口病患者的病原体进行监测，可以对手足口病患者的病原学进行有效诊断，帮助患者进行早期治疗，预测该区域的手足口病的主要病原体，方便及时采取预防措施。

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