抑郁症是指由多重因素引起的精神障碍，主要特征是显著且持久的情绪低落，临床表现有心境低落、思维迟缓、意志活动减退和认知功能损害，严重时会出现自杀行为。流行病学调查数据显示，抑郁症已成为世界范围内严重威胁人类健康的第二大疾病[1]。
中药在治疗抑郁方面应用颇多，且经多年临床实践证明，无论是单味中药还是中药复方，亦或是中药提取物都有显著的治疗效果，例如甘草、柴胡、白芍、大黄等中药均具有抗抑郁功效。中药治疗抑郁症的机制之一是降低炎症因子水平、升高抗炎因子水平[2]。
氧化应激是抑郁症发病机制中的重要过程，罗汉果甜苷含有抗氧化的活性成分，具有保护氧化应激反应的作用。研究发现芒果苷可显著缩短行为绝望抑郁模型小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间，具有一定的抗抑郁作用[3]。且文献也表明罗汉果甜苷与芒果苷具有协同抗炎作用[4]，提示罗汉果甜苷可能具有潜在抗抑郁效应。
本研究利用经典的药理实验方法建立行为绝望小鼠模型，探讨右江流域地道中草药罗汉果提取物罗汉果甜苷对小鼠行为绝望中的抗抑郁效应，及其与芒果苷的协同抗抑郁效应。本课题具一定的民族地区特色，所研究的内容切合医学研究的需要，对初步筛选抗抑郁症药物具有重要作用，为抑郁症的治疗提供了理论指导意义。
1 资料与方法
1.1 设备及器材
天平、电子秤、灌胃针
1.2 药物及试剂
芒果苷（桂林恒顺成实验设备有限公司 规格：≥95%HPLC）；罗汉果甜苷（南宁栢朋生物技术有限公司 ）；盐酸氯米帕明（桂林恒顺成实验设备有限公司 ）；生理盐水（由右江民族医学院生化实验室提供）
1.3 实验动物
健康昆明种小鼠，等级为SPF级，雌雄各半，体重控制在18~22g范围内，由长沙市天勤生物技术有限公司购置，许可证号为SCXK（湘）2019-0014。动物饲养于普通实验室，室温（25±2℃），相对湿度（60±5%），每2天更换1次垫料，每天喂食适量标准颗粒饲料，自由取食饮水。
2 方法
2.1 分组
将90只生长状况相似，体重在18~22g范围内的健康昆明种小鼠（雌雄兼用且各半）平均随机分为9组，每组10只：空白组，①组：生理盐水；阳性对照组，②组：盐酸氯米帕明 20.0 mg·kg -1；实验组，③组：芒果苷60.0 mg·kg -1；④组：罗汉果甜苷15.0 mg·kg - 1（低剂量）；⑤组：罗汉果甜苷30.0 mg·kg - 1（中剂量）；⑥组：罗汉果甜苷60.0 mg·kg - 1（高剂量）；⑦组：罗汉果甜苷15.0 mg·kg -1和芒果苷60.0 mg·kg -1（混合1组）；⑧组：罗汉果甜苷30.0 mg·kg -1和芒果苷60.0 mg·kg -1（混合2组）；⑨组：罗汉果甜苷60.0 mg·kg -1和芒果苷60.0 mg·kg -1（混合3组）。其余90只小鼠采用以上相同方式进行分组。
2.2 给药
给小鼠灌胃0.1ml/10g，1次/d，连续14d。实验期间，给予小鼠自由进食饮水的条件。
2.3 小鼠悬尾实验
末次给药1 h后，在小鼠尾部距末端约1-1.5cm处用尼龙绳固定于距地面20cm左右的铁杆上，使其头部向下悬挂，同时进行摄像，观察小鼠的毛色和行为变化。小鼠会为克服不正常体位而出现头部向上、四肢挣扎的行为，企图摆脱该困境，但经过努力活动一段时间后仍无法摆脱，出现毛色变暗，间断性不动，呈现失望状态，最后停止挣扎。累计各组小鼠8min内的不动时间。
2.4 强迫小鼠游泳实验
末次给药1h后，将小鼠置于直径为20cm，水深20cm，水温25℃的透明容器内自由游泳，杜绝外界环境的干扰。与此同时进行摄像操作，观察小鼠的行为变化。刚开始小鼠会努力游动四肢，拼命挣扎，试图逃出恶劣环境，但活动一段时间后，发现为无可回避的压迫环境，开始出现四肢活动缓慢的绝望情形，最后停止挣扎，或呈现漂浮状态即仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面以上。累计各组小鼠15min内的不动时间。
2.5 数据处理
各组实验数据均以平均数±标准差（x̄±s）表示，组间比较用t检验。使用SPSS22.0统计软件，采用单因素方差分析实验数据。
3 结果
3.1 小鼠悬尾实验
在制造小鼠行为绝望模型前，给阳性对照组和实验组的小鼠连续给予对应药物14d。在小鼠悬尾实验中，阳性对照组盐酸氯米帕明20mg·kg - 1显著缩短小鼠悬尾不动时间，罗汉果甜苷在15、30、60mg·kg - 1剂量下也能显著缩短小鼠悬尾不动时间（P＜0.01或P＜0.05），而罗汉果甜苷15，30，60mg·kg - 1不同剂量分别与60mg·kg - 1芒果苷合用的混合组也显示同样作用（P＜0.01）。
表1 小鼠悬尾实验不动时间（x̄±s）n=10
与①组空白组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。
3.2 强迫小鼠游泳实验
药物干预14d后建立小鼠行为绝望模型，在强迫小鼠游泳实验中，罗汉果甜苷在15、30、60mg·kg - 1剂量与空白组相比能显著缩短小鼠停止不动时间（P＜0.01）。而罗汉果甜苷15、30、60mg·kg - 1不同剂量分别与60mg·kg - 1芒果苷合用的混合组也能大幅减少静止不动时间（P＜0.01），且第⑦组效果最佳。
表2 强迫小鼠游泳实验不动时间（x̄±s）n=10
与①组空白组比较，＊＊P＜0.01。
4 结论
本研究结果显示，与空白组相比，本实验剂量（15、30、60mg·kg -1）罗汉果甜苷灌胃的小鼠均能在小鼠悬尾实验和强迫小鼠游泳实验中减少其不动时间，证明罗汉果甜苷对实验性行为绝望小鼠具有一定的抗抑郁作用。
并且相对于空白组，本实验剂量罗汉果甜苷（15、30、60mg·kg -1）与芒果苷（60mg·kg -1）混合配置灌胃的小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中停止不动时间显著缩短（P＜0.01），比单独使用罗汉果甜苷或芒果苷静止时间更短，证明罗汉果甜苷与芒果苷对行为绝望小鼠的抗抑郁作用具有协同效应。但实验结果显示，其药用效果与药物浓度间的变化并不呈现规律性变化，药物发挥最佳效果的浓度和配比仍有待进一步探索。
5 讨论
抑郁症是由多方面因素共同影响造成的，其发病机制复杂多样，目前尚待探索。但相关研究在探讨急性期抑郁症患者的免疫炎症和应激水平时，发现抑郁症患者的应激水平降低。其中，氧化应激反应被认为是抑郁症发生、发展的重要过程[5]。 氧化应激是指包括活性氧和活性氮对机体造成的氧化损伤。当自由基产生过多或氧化-抗氧化系统出现故障时，未被清除的自由基在体内积聚，对机体导致损害作用。近年来国内外大量研究显示，自由基可能在神经精神疾病的发病过程中起着重要作用。PC12是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。 已有相关研究证明罗汉果甜苷能缓解氧化应激导致的PC12细胞活力下降，并能增强PC12细胞的抗氧化能力[6]。
目前，临床常用的抗抑郁药物多种多样，但多数药物会对心血管系统、神经系统、消化系统、泌尿系统等产生不良反应，会出现不同程度的副作用。而罗汉果作为中药，对各个系统的作用效果较为温和，目前尚未发现对人体具有刺激作用。其中，罗汉果甜苷作为罗汉果中主要的皂苷成分，是最主要的抗氧化活性成分，提示其具有潜在的临床开发和应用的药用价值。本实验聚焦罗汉果甜苷与芒果苷对实验性行为绝望小鼠模型的抗抑郁作用，对其潜在的药用价值进行验证，为相关抑郁症的治疗提供了临床开发和使用的理论基础。实验结果罗汉果甜苷对行为绝望小鼠的抗抑郁作用可能与其能清除自由基、提高机体抗氧化能力进而保护神经细胞有关，更详尽的机制有待进一步探究
参考文献：
[1]苑杰，严辞，刘吴，等. 抑郁症生物标志物研究进展[J]. 国际精神病学杂志，2015，4（2）：103-107
[2]张翕婷，王怡，李霖，等. 炎性因子与其他抑郁相关因素关系的研究现状[J]. 中国临床药理学杂志，2018, 34(21): 2568-2571.
[3]郑子敏，韦健全，罗莹，潘勇，薛强. 芒果苷对行为绝望小鼠的抗抑郁作用研究[J].时珍国医国药，2009-04-20.
[4]黄云，胡文姬，李学坚，邱宏聪，刘布鸣. 罗汉果甜苷对芒果苷抗炎的协同效应[J]. 广西科学，2016.01.06.
[5]周莉娜，马青艳，何潇言，赵斌斌，范雅娟.急性期抑郁症患者体内免疫炎症和氧化应激水平与临床症状的相关性探讨[J]. 精神医学杂志，2019-02-01.
[6]夏星，钟振国，肖颖梅.罗汉果甜苷对PC12细胞氧化应激的保护作用研究[J].时珍国医国药.2013-04-20.
