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传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用
陈桂花1,2,3 贺文斌2 徐黎明2 赵景壮2 任广明2,4 邵轶智2 段凯越1,2,3 卢彤岩2,4
1.上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心;2.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所;3.上海海洋大学农业农村部渔业动植物病原库;4.中国水产科学研究院长江水产研究所

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摘要: 为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus, IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达,以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)对抗血清效价进行测定,并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test, IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株,对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定。结果表明:SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP3蛋白条带单一,相对分子质量约为45 000,与理论值相符;抗血清效价分析显示,所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16 000,与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32 000;间接免疫荧光抗体
关键词: 传染性胰脏坏死病毒蛋白表达VP3蛋白免疫原性
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