烟草中生物碱的含量与烟草制品的生理强度、刺激性,香吃味等关系密切[1-3]。生物碱含量过高过低都会造成烟草制品吸食品质的变差。烟草中的生物碱还是烟草特有亚硝胺形成的前体物[4-5]。因此研究不同品种烤烟中的生物碱含量,找出了它们之间的差异,对于揭示烟草生物碱和烟草品质的关系有积极意义。
1实验部分
1.1试验仪器和试剂
试验材料是云南产K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97,5个品种的178个烤烟样品。
振荡器(THZ-C) 江苏太仓实验设备厂, 电子天平(AB104-S) METTLER TOLEDO, 气相色谱-质谱联用仪(Clarus500/Clarus600T) PerkinElmer股份有限公司
氨水,二氯甲烷均为分析纯,汕头西陇化工有限公司;烟碱(纯度>98%),降烟碱(纯度>95%) ,新烟碱(纯度>95%),可替宁(纯度>95%),喹啉(纯度>98%)生产厂家均为Sigma 。
1.2样品处理与分析
将烟叶样品放入烘箱内40℃下保持24h,然后粉碎过40目筛网,烟末贮存于密闭不透光塑料瓶中备用。称取0.5g的烟末,置于50ml具塞三角瓶中,加入1ml 的喹啉二氯甲烷内标溶液和5ml 6%的氨水,再加入25ml二氯甲烷,室温下振荡萃取1.5h,静置1h待水相与有机相完全分层后,取1.5ml有机相过0.2μm滤膜进行GC/MS分析。
分析条件:色谱柱Elite-5MS(30m×0.25mm×0.25µm)石英毛细管柱;进样口温度:240℃;载气:高纯氦气,流速1ml/min;进样量:2µl,分流进样,分流比20:1。
程序升温:初温80℃,保持1min,再以10℃/min的速率升温至230℃,保持10min;传输线温度:230℃;电离方式:EI;离子源温度:170℃;电离能量:70eV;扫描范围:33~350 amu
烟碱、降烟碱、新烟碱采用在相同分析条件下与标准样品对照保留时间,结合GC/MS的鉴定结果进行定性,没有标样的生物碱采用GC/MS法定性。烟碱、降烟碱、新烟碱、可替宁采用内标法标准曲线定量。新烟草碱采用与之结构相似的新烟碱的标准曲线定量。
表1生物碱标准曲线
从表1可知试验方法对于烟碱、降烟碱、新烟碱、可替宁具有良好的线性。
2.试验结果与分析
表2不同品种烤烟中烟碱的基本统计量
表3不同品种烤烟中烟碱的方差分析
由表3可以看出K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中烟碱的含量没有显著差异。
表4不同品种烤烟中降烟碱的基本统计量
表5不同品种烤烟中降烟碱的方差分析
由表5可以看出K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中降烟碱的含量差异不显著。
表6不同品种烤烟中新烟碱的基本统计量
表7不同品种烤烟中新烟碱的方差分析
由表7可知, K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中新烟碱的含量差异不显著。
表8不同品种烤烟中新烟草碱的基本统计量
表9不同品种烤烟中新烟草碱的方差分析
由表9可知, K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中新烟草碱的含量差异也不显著。
表10不同品种烤烟中可替宁的基本统计量
表11不同品种烤烟中可替宁的方差分析
表12不同品种烤烟中可替宁的Duncan多重比较
由表11可知, K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97,5个品种烤烟中可替宁的含量存在显著差异。由表12可以看出,云烟97和K326、云烟85、云烟87存在显著差异;云烟97和云烟87存在极显著的差异;红大、K326、云烟85、云烟87之间差异不显著。
结论
云南主栽的K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97等5个品种烤烟中烟碱、降烟碱、新烟碱、新烟草碱四种主要生物碱的含量并不存在显著差异。而5种烤烟中生物碱可替宁的含量差异显著。其中,云烟97和K326、云烟85、云烟87中可替宁含量存在显著差异;云烟97和云烟87的差异达到了极显著水平;红大、K326、云烟85、云烟87之间则不存在显著差异。
参考文献:
[1] H. R. burton, R. A. Anderson, P. D. Fleming, etal. Changes in chemical composition of burley tobacco during senescence and curing. 2. Acylated pyridine alkaloids[J]. Agric. Food Chem, 1988, 36: 579-584.
[2] 陈冬林, 周冀衡. 湖南烤烟烟碱含量空间分布特征及与香吃味的关系[J]. 中国烟草科学, 2009, 30(50): 34-40.
[3] 于川芳, 卢斌斌, 牟定荣. 卷烟劲头与其烟丝、烟气主要化学成分的相关性[J]. 烟草科技, 2009, 9: 34-37.
[4] 张峻松, 许小博, 陈芝飞, 等. 烟草特有亚硝胺分析研究进展 [J]. 郑州轻工业学院学报(自然科学版), 2007, 4 (22): 13-16.
[5] R. A Anderson, P. D. Fleming, H. R. Burton, etal. N-Acyland N-nitroso-pyridine alkaloids in alkaloid lines of burley tobacco during growth and air-curing[J]. Agric. Food Chem, 1989, 37: 44-50.