烟草中生物碱的含量与烟草制品的生理强度、刺激性，香吃味等关系密切[1-3]。生物碱含量过高过低都会造成烟草制品吸食品质的变差。烟草中的生物碱还是烟草特有亚硝胺形成的前体物[4-5]。因此研究不同品种烤烟中的生物碱含量，找出了它们之间的差异，对于揭示烟草生物碱和烟草品质的关系有积极意义。
1实验部分
1.1试验仪器和试剂
试验材料是云南产K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97，5个品种的178个烤烟样品。
振荡器(THZ-C) 江苏太仓实验设备厂, 电子天平(AB104-S) METTLER TOLEDO, 气相色谱-质谱联用仪(Clarus500/Clarus600T) PerkinElmer股份有限公司
氨水,二氯甲烷均为分析纯,汕头西陇化工有限公司;烟碱(纯度＞98%),降烟碱(纯度＞95%) ,新烟碱(纯度＞95%),可替宁(纯度＞95%),喹啉(纯度＞98%)生产厂家均为Sigma 。
1.2样品处理与分析
将烟叶样品放入烘箱内40℃下保持24h，然后粉碎过40目筛网，烟末贮存于密闭不透光塑料瓶中备用。称取0.5g的烟末，置于50ml具塞三角瓶中，加入1ml 的喹啉二氯甲烷内标溶液和5ml 6%的氨水，再加入25ml二氯甲烷，室温下振荡萃取1.5h，静置1h待水相与有机相完全分层后，取1.5ml有机相过0.2μm滤膜进行GC/MS分析。
分析条件：色谱柱Elite-5MS（30m×0.25mm×0.25µm）石英毛细管柱；进样口温度：240℃；载气：高纯氦气，流速1ml/min；进样量：2µl，分流进样，分流比20:1。
程序升温：初温80℃，保持1min，再以10℃/min的速率升温至230℃，保持10min；传输线温度：230℃；电离方式：EI；离子源温度：170℃；电离能量：70eV；扫描范围：33～350 amu
烟碱、降烟碱、新烟碱采用在相同分析条件下与标准样品对照保留时间，结合GC/MS的鉴定结果进行定性，没有标样的生物碱采用GC/MS法定性。烟碱、降烟碱、新烟碱、可替宁采用内标法标准曲线定量。新烟草碱采用与之结构相似的新烟碱的标准曲线定量。
表1生物碱标准曲线
从表1可知试验方法对于烟碱、降烟碱、新烟碱、可替宁具有良好的线性。
2.试验结果与分析
表2不同品种烤烟中烟碱的基本统计量
表3不同品种烤烟中烟碱的方差分析
由表3可以看出K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中烟碱的含量没有显著差异。
表4不同品种烤烟中降烟碱的基本统计量
表5不同品种烤烟中降烟碱的方差分析
由表5可以看出K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中降烟碱的含量差异不显著。
表6不同品种烤烟中新烟碱的基本统计量
表7不同品种烤烟中新烟碱的方差分析
由表7可知， K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中新烟碱的含量差异不显著。
表8不同品种烤烟中新烟草碱的基本统计量
表9不同品种烤烟中新烟草碱的方差分析
由表9可知， K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97这5个品种烤烟中新烟草碱的含量差异也不显著。
表10不同品种烤烟中可替宁的基本统计量
表11不同品种烤烟中可替宁的方差分析
表12不同品种烤烟中可替宁的Duncan多重比较
由表11可知， K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97，5个品种烤烟中可替宁的含量存在显著差异。由表12可以看出，云烟97和K326、云烟85、云烟87存在显著差异；云烟97和云烟87存在极显著的差异；红大、K326、云烟85、云烟87之间差异不显著。
结论
云南主栽的K326、红大、云烟85、云烟87、云烟97等5个品种烤烟中烟碱、降烟碱、新烟碱、新烟草碱四种主要生物碱的含量并不存在显著差异。而5种烤烟中生物碱可替宁的含量差异显著。其中，云烟97和K326、云烟85、云烟87中可替宁含量存在显著差异；云烟97和云烟87的差异达到了极显著水平；红大、K326、云烟85、云烟87之间则不存在显著差异。
参考文献：
［1］ H. R. burton, R. A. Anderson, P. D. Fleming, etal. Changes in chemical composition of burley tobacco during senescence and curing. 2. Acylated pyridine alkaloids［J］. Agric. Food Chem, 1988, 36: 579-584.
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［3］ 于川芳, 卢斌斌, 牟定荣. 卷烟劲头与其烟丝、烟气主要化学成分的相关性［J］. 烟草科技, 2009, 9: 34-37.
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［5］ R. A Anderson, P. D. Fleming, H. R. Burton, etal. N-Acyland N-nitroso-pyridine alkaloids in alkaloid lines of burley tobacco during growth and air-curing［J］. Agric. Food Chem, 1989, 37: 44-50.
