文章-世纪中文出版社

平洪领1 张涛1 史会来1 付铁中2 何杰1 李彬1 卢斌1 俞学军1 《水产研究进展》 2024年5期

摘要:

为研究斑鰶不同月龄表型性状的生长规律和特征，及最佳生长季节各性状与月龄的关系。采用主成分和判别分析的方法对2、4、6和8月龄斑鰶的全长、体长、头长、躯干长、尾柄长、眼径、体高、尾柄高、体宽、眼间距和体重等11个性状进行分析。结果显示，斑鰶不同月龄各性状指标间呈现不同程度的正相关，各月龄的体重与全长、体长、体高和体宽的相关系数均较大，眼径和眼间距2个性状与其他性状之间的相关系数均较小，8月龄各性状对体重的相关系数均小于2、4和6月龄。斑鰶不同月龄性状的主成分有所不同，各月龄第一主成分均以增重、增长的生长发育特性为主；第二主成分为2月龄指向体宽的发育情况，4、6和8月龄指向眼径发育情况；第三主成分为2和4月龄反映头部发育情况，6月龄反映眼径发育情况，8月龄反映体宽的发育情况。通过逐步判别分析法，剔除掉3个性状指标，建立各月龄的判别函数式，总的判别准确率为99.3%，2、4和8月龄的判别准确率达到100%。斑鰶2～8月龄的体长与体重的关系为W=0.017L2.929（R2=0.981）。研究表明，全长、体长、体高和体宽是影响斑鰶生长发育最重要的表型性状指标，建立了不同生长阶段的判别函数式，生长方式为等速生长（2～8月龄）。本研究为斑鰶的选择育种工作提供理论依据和建议测量指标。

基于SSR-seq技术评估中间球海胆多代选育群体和普通养殖群体的遗传多样性下载：79 浏览：494

刘雷1 张伟杰1 刘岩松1 冷晓飞2 欧凡江1 臧晓宁1 李旭光2 丁君1 常亚青1 《水产研究进展》 2023年5期

摘要:

为明确不同选育群体中间球海胆的遗传多样性和遗传结构，利用SSR-seq技术和15个微卫星位点，对1个家系选育群体（FP）、1个群体选育群体（IP）和1个未经选育的普通养殖群体（CP）的遗传多样性及遗传结构进行了分析。结果显示，15个微卫星位点共检测出112个等位基因，FP、IP、CP 3个群体的平均观测等位基因数（Na）分别为5.077、5.133和6.133个，平均有效等位基因（Ne）分别为2.816、2.873和3.638个，平均观测杂合度（H_o）分别为0.522、0.441和0.501，平均期望杂合度（He）分别为0.595、0.599和0.667，平均多态性信息含量（PIC）分别为0.546、0.543和0.623。家系选育群体（FP） He与H_o的差值（0.073）低于IP （0.158）和CP （0.166），平均固定指数（F）(0.115)低于IP （0.248）和CP （0.246）。3个群体间遗传分化系数(Fst)介于0.018～0.176，为中低等程度的遗传分化。分子方差分析（AMOVA）结果显示，3个群体的遗传变异主要源于个体间。主成分分析（PCoA）和聚类进化树结果均显示，3个群体之间的亲缘关系较近，其中IP群体遗传分化程度最高。研究表明，3个中间球海胆群体均具有较高的遗传多样性，多代家系选育和群体选育均未明显降低群体的遗传多样性，家系选育更有利于保持群体的杂合度和控制群体的近交水平，群体选育则会提升群体的遗传分化程度。

棘皮动物弧菌诱导中间球海胆免疫致敏现象分析下载：18 浏览：243

殷维骏刘岩松田文卓欧凡江刘雷丁君张伟杰常亚青《中国水产学报》 2024年4期

摘要:

为探究中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)是否存在免疫致敏现象，使用棘皮动物弧菌(Vibrio echinoideorum)对中间球海胆进行重复感染(首次、二次菌浓度分别为10～3、10～4CFU/mL),检测并比较了两次注射感染后不同时间点中间球海胆体腔细胞密度、吞噬能力、酸性磷酸酶(ACP)活力、活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(T-AOC)等相关免疫指标的变化，以及二次感染后免疫致敏组和对照组间成活率的差异。结果表明：与首次感染相比，二次感染时诱导致敏组的体腔细胞总密度、吞噬细胞密度、ACP、ROS和T-AOC等均出现显著上升(P<0.05),且响应时间明显缩短，达到峰值的时间分别提前了36、36、84、12、36h,且各指标的峰值均显著高于首次感染(P<0.05);二次感染后，诱导致敏组在6h时的吞噬率(45.41%±6.39%)显著高于对照组(33.17%±1.94%);经过棘皮动物弧菌低浓度诱导后，诱导致敏组存活率(43.33%±10.00%)显著高于未经诱导的阳性对照组(7.78%±10.71%)(P<0.05)。研究表明，低浓度棘皮动物弧菌能诱导中间球海胆产生免疫致敏现象，此结果可为中间球海胆的疾病防控提供新思路。

干露及恢复对中间球海胆抗氧化能力、细胞凋亡和免疫相关基因表达的影响下载：26 浏览：266

林威港1,2 孙琦3 海航瑜1 刘亚婷1 赵鹏1 常亚青1 马得友1 《中国水产学报》 2024年2期

摘要:

为研究干法运输对中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)活力的影响，采用低温(4℃)干露胁迫12、24、36h后再浸润恢复12h的处理方法，测定了湿质量为(3.57±0.63)g的中间球海胆体腔细胞超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC)水平，通过流式细胞仪检测了细胞凋亡情况，利用实时定量PCR分析了不同时间干露胁迫下免疫相关基因LYZ、TLR1及凋亡相关基因Caspase-3和Caspase-9在体腔细胞中的表达情况。结果表明：干露试验组海胆体腔液T-SOD活力、MDA含量和T-AOC水平随干露时间的延长呈现先升高后降低的变化趋势，干露12h时各指标值均达到最高，随后下降，并于复水12h时接近对照组(P>0.05);免疫相关基因LYZ和TLR1总体上随干露时间的延长呈先减弱后增强的表达趋势，分别在干露24、36h时达到峰值，入水恢复12h时两基因的表达量显著低于对照组(P<0.05);发生凋亡的体腔细胞比率随干露时间延长的变化趋势与T-AOC水平的变化趋势相似，干露12h时达到最高值，而Caspase-3、Caspase-9基因的表达量具有时间累积效应，分别在干露24、36h时显著高于对照组和其他处理组(P<0.05)。研究表明，中间球海胆具有一定的耐干露能力，通过抗氧化酶系统维持活性氧自由基的动态平衡，LYZ、TLR1等固有免疫分子和Caspase依赖性细胞凋亡因子在应对干露胁迫、机体维持内稳态的过程中发挥重要作用。

舟山沿岸水域曼氏无针乌贼个体繁殖力特性下载：57 浏览：308

刘连为1,2 隋宥珍1,2 徐开达1,2 徐晓萱2 刘姝含2 谢慕原2 徐汉祥2 周永东1,2 《中国水产学报》 2022年6期

摘要:

为揭示曼氏无针乌贼Sepiella maindroni的生殖策略，以潜在繁殖力和相对繁殖力为指标，检测其个体繁殖力，并拟合潜在繁殖力与生物学指标的关系。结果表明：舟山沿岸水域曼氏无针乌贼雌、雄个体优势胴长组分别为91～130mm与81～120mm,优势体质量组分别为120.1～240.0g与80.1～180.0g,雌、雄个体间胴长和体质量均有极显著性差异(P<0.01);雌、雄个体性腺成熟度均以Ⅴ期为主，分别占68.63%和65.35%;Pearson相关性分析显示，性腺成熟系数与缠卵腺指数、精荚复合体指数密切相关(P<0.05);雌性性成熟个体的潜在繁殖力平均值为(1 121.01±329.55)cells,胴长和体质量相对繁殖力平均值分别为(9.76±2.43)cells/mm、(5.77±1.28)cells/g,潜在繁殖力与胴长、体质量、缠卵腺质量呈幂函数关系，与缠卵腺长呈对数关系，与卵巢成熟系数呈线性函数关系；雄性性成熟个体的潜在繁殖力平均值为(2 769.48±1 195.90)条，胴长和体质量相对繁殖力平均值分别为(26.38±11.02)条/mm、(19.82±8.66)条/g,潜在繁殖力与体质量呈指数函数关系，与精荚囊长、精荚复合体质量均呈幂函数关系，与胴长、精巢成熟系数的相关关系不显著。研究表明，经过10多年的增殖放流，舟山沿岸水域曼氏无针乌贼潜在繁殖力及精卵比明显降低，在曼氏无针乌贼规模化养殖过程中应采用合理的亲本投放性比，进而达到合适的潜在精卵比。

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其免疫原性分析下载：62 浏览：373

孟少东1,2 姜新宇2 葛恒2 胡光耀2 杨大佐1 张家林2 李强2 《中国水产学报》 2021年4期

摘要:

为进一步研究鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2)ORF4蛋白的功能,通过PCR扩增CyHV-2 ORF4基因,并构建重组穿梭质粒pFastBac HTA-ORF4,将其转化至大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞后获得重组杆粒Bacmid-ORF4;采用脂质体法转染Sf9细胞后,利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白,采用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并通过小鼠免疫试验分析其免疫原性。结果表明:转染72h后Sf9细胞逐渐呈现出细胞变圆、细胞核明显增大的形态变化;间接免疫荧光结果显示,重组杆状病毒感染的Sf9细胞中出现了明显的绿色荧光;Western blot结果显示,纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能够与抗His单抗发生特异性反应;小鼠免疫试验显示,纯化的CyHV-2 ORF4蛋白能诱导小鼠产生特异性免疫反应。研究表明,本研究中获得的CyHV-2 ORF4蛋白有较好的免疫原性,为CyHV-2 ORF4蛋白的功能解析提供了良好材料。

母源因子boule在光棘球海胆性腺中的表达与定位下载：63 浏览：360

韩亚伦魏金亮崔洲平张健张伟杰温斌常亚青孙志惠《中国水产学报》 2021年3期

摘要:

为鉴定光棘球海胆Mesocentrotus nudus生殖细胞标记基因,通过基因克隆、荧光定量PCR及切片原位杂交等技术分析了光棘球海胆(湿体质量为76.8g±10.0g)母源因子(boule)基因的分子特征及动态表达模式。结果表明:光棘球海胆boule cDNA序列全长为1788bp,其中,3′非编码区为601bp, 5′非编码区为146bp,开放阅读框(open reading frame, ORF)为1041bp,共编码346个氨基酸,包含一个保守的RRM结构域;荧光定量PCR结果显示,boule为母源因子,在整个胚胎发育时期均有表达;boule基因在处于生长期(stageⅡ)光棘球海胆的肠、管足、体腔液和性腺中均有表达,其中,boule基因在精巢表达量最高(P<0.05);在卵巢中表达量随卵母细胞的成熟而逐渐升高,在成熟期(stageⅣ)卵巢中达到最高,精巢中表达量仅在生长期(stageⅡ)及成熟前期(stageⅢ)有较高表达;切片原位杂交显示,boule基因在光棘球海胆精巢的生殖细胞中特异表达,卵巢中未检测到阳性细胞信号。研究表明,光棘球海胆boule基因是雄性生殖细胞标记基因,本研究结果可为海胆雄性生殖细胞发育相关研究提供数据资料。

黑嘴病病原菌人工感染对中间球海胆吞噬作用相关免疫指标的影响下载：68 浏览：362

王中1 张伟杰1 刘雷1 冷晓飞2 高洪涛2 江会杰1 常亚青1 《中国水产学报》 2021年3期

摘要:

为探讨黑嘴病病原菌感染对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius吞噬作用相关免疫指标的影响,选用壳径约2cm的中间球海胆108只,用注射器针头刺入海胆体腔,再用浓度10～2CFU/mL的黑嘴病病原菌液浸泡,经病原菌胁迫后0、1、6、12、24、48h时测定各体腔细胞密度、细胞凋亡率、细胞坏死率、吞噬作用相关免疫指标(酸性磷酸酶(ACP)活性、活性氧(ROS)含量和总抗氧化能力(T-AOC))及吞噬相关免疫基因表达量,并利用有效吞噬细胞比例计算几种免疫指标的单细胞贡献值。结果表明:中间球海胆体腔液中变形吞噬细胞密度在黑嘴病病原菌胁迫1h后下降约80%,同时吞噬细胞凋亡率上升至60.92%;体腔细胞中ACP、ROS和T-AOC在胁迫后呈现不同程度的变化趋势,计算为单个吞噬细胞平均贡献值后,这些指标及C3-pre和Clec4g基因相对表达量均一致呈现先升高后下降趋势,且均在胁迫1h时达到最高,分别较胁迫前升高3、6、7、4、7倍;在胁迫后6～24h,虽然吞噬细胞密度逐渐恢复,但其凋亡率呈下降趋势,坏死率逐渐上升至63.98%,C3-pre和Clec4g基因相对表达量,以及ACP、ROS和T-AOC的单个吞噬细胞平均贡献值均出现下降趋势;在胁迫后48h,Caspase-8基因相对表达量上调至最高值,约为0h的2倍。研究表明,中间球海胆在病原菌入侵前期,通过提高ACP活性、ROS含量和T-AOC及吞噬相关免疫基因表达等方式增强吞噬作用,并通过细胞凋亡和再生保持细胞数量,在病原菌入侵后期,由于不能清除病原菌,上述指标均下降,吞噬作用逐渐减退,细胞坏死率大幅上升,导致海胆发病。

3种宿主源盾纤毛虫的分离鉴定及体外培养研究下载：68 浏览：385

高延奇王森刘娟党慧凤黎睿君《中国水产学报》 2021年2期

摘要:

为进一步鉴定和体外培养引起养殖海水鱼类和棘皮动物体表溃烂的致病性盾纤毛虫,分别从辽宁地区养殖的患病刺参Apostichopus japonicus、红鳍东方鲀Takifugu rubripes和大菱鲆Scophthalmus maximus的体表分离出3种盾纤毛虫,采用活体观察、甲醛固定观察、扫描电镜观察、醋酸洋红染色及甲基绿派洛宁染色的方法,对3种盾纤毛虫的形态特征进行分析;采用PCR技术获得其18S rDNA基因序列,并与同源序列进行比对及构建系统发育树;选用L-15、MEM和RPMI1640培养基,在相同培养条件下培养7d,比较3种盾纤毛虫种群密度的大小;采用盾纤毛虫最适培养基,在不同的温度(10、15、20、30℃)、盐度(13、20、30、40)、pH(4.2、5.2、7.2、9.2)条件下培养7d,比较3种盾纤毛虫种群密度的大小。结果表明:从刺参和红鳍东方鲀体表分离出的盾纤毛虫形态均与尾丝虫Uronema sp.相似,且18S rDNA序列与尾丝虫的一致性高达99%,在系统发育树上以100%的最高置信度值与尾丝虫聚为一支;从大菱鲆体表分离出的盾纤毛虫形态与伪康纤虫Pseudocohnilembus sp.相似,且18S rDNA序列与伪康纤虫的一致性高达99%,在系统发育树上以100%的最高置信度值与伪康纤虫聚为一支;体外最适培养基筛选结果显示,L-15培养基培养的盾纤毛虫种群密度高于MEM和RPMI1640培养基;体外培养条件试验结果显示,推荐体外培养条件为温度20℃、盐度30、pH 7.2。本研究结果可为海水养殖动物体表溃烂病原盾纤毛虫的分离鉴定及基于盾纤毛虫全虫疫苗研制的体外培养条件优化提供参考。

异育银鲫肿瘤坏死因子α蛋白的原核表达、纯化及促凋亡活性分析下载：40 浏览：363

崔正一1,2 胡光耀2 姜新宇2 王佳2 于新然1 乔帼2 李振2 李强2 张家林2 《中国水产学报》 2020年4期

摘要:

为了实现异育银鲫Carassius auratus gibelio肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)在大肠杆菌表达系统的高效表达,并研究其在促鲫鱼细胞凋亡中的作用,采用PCR的方法从体质量(15±1) g异育银鲫脾脏组织中扩增TNF-α基因,构建pET28a-TNF-α重组质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,通过Ni亲和层析柱纯化并采用尿素浓度梯度透析法进行蛋白复性,最后用rTNF-α蛋白处理鲫鱼鳍条细胞,通过Hoechst 33258染色法和荧光定量PCR技术,分析异育银鲫经rTNF-α蛋白处理后鲫鱼细胞的凋亡情况及凋亡相关基因Caspase 3和Caspase 8的表达变化。结果表明:诱导后获得了相对分子质量约为23 000的蛋白条带,且重组蛋白以包涵体形式存在;Western-blot显示,纯化产物与抗His单抗在相对分子量约23 000处出现了明显的反应条带,表明成功地实现了异育银鲫TNF-α的重组表达;进一步采用Hoechst 33258染色后发现,与正常细胞相比,经rTNF-α蛋白处理后的细胞核染色加深,呈碎块状浓染现象;荧光定量PCR显示,rTNF-α蛋白处理能使凋亡相关基因Caspase 3和Caspase 8 mRNA表达水平呈明显的上调趋势。研究表明,本文成功实现了异育银鲫TNF-α蛋白在大肠杆菌中的高效表达,且rTNF-α蛋白可诱导鲫鱼鳍条细胞发生凋亡,该工作将为后续研究TNF-α蛋白的抗病毒作用奠定基础。

饲料脂肪水平对淡黑镊丽鱼生长及色素蓄积的影响下载：52 浏览：386

付旭崔前进陈冰杨博学蔡忠璐王旭刘霞姜志强韩雨哲《中国水产学报》 2020年3期

摘要:

为研究饲料脂肪水平对淡黑镊丽鱼Labidochromis caeruleus生长、体态及色素积累的影响,选取淡黑镊丽幼鱼120尾（初始体质量为1.70g±0.09g）,分为Z1（对照）、Z2、Z3、Z4、Z5共5组,投喂饲料脂肪水平分别为7.44%、9.86%、10.91%、15.25%和23.69%的等氮饲料,饲料中添加叶黄素为200mg/kg,每个试验组设3个平行,养殖68d后测定淡黑镊丽鱼生长及色素蓄积情况。结果表明:Z3组淡黑镊丽鱼终末体质量、特定生长率和增重率均最高且显著高于Z1组（P<0.05）;Z3组饲料系数最小;Z3、Z4组存活率最高,Z5组存活率最低且显著低于其他组（P<0.05）;随饲料脂肪水平的增加鱼体脏体比虽有升高趋势但变化不显著（P>0.05）,而Z3、Z4组肝体比则显著低于其他组（P<0.05）;Z3组肥满度显著高于其他组（P<0.05）;随饲料脂肪水平的升高,鱼体各组织总类胡萝卜素含量呈升高趋势;随饲料脂肪水平的增加各组鱼体亮度（L*）无显著性变化（P>0.05）,但黄度（b*）呈先升高后下降、红度（a*）呈升高的趋势,随着时间的延长,各组红度和黄度都持续升高;随饲料脂肪水平的增加鱼体肝脏谷丙转氨酶活力呈增加趋势,Z5组酶活力最高且显著高于Z1组（P<0.05）。研究表明,淡黑镊丽鱼饲料中适宜的脂肪水平为10.76%,饲料中脂肪过高或过低对淡黑镊丽鱼的生长和体色均有一定影响。

太平洋鳕抗菌肽Hepcidin基因克隆及体外表达研究下载：55 浏览：376

吴玲梅1 顾杰1 温智清2,3 贾鹏2,3 刘瑞婷1 蒋洁兰1 刘荭2,3 郑晓聪2,3 毛明光1 《中国水产学报》 2020年2期

摘要:

为揭示太平洋鳕Gadus macrocephalus抗菌肽Hepcidin(GmHep)的分子结构和表达特性,利用qPCR法对平均体质量为2.438kg鳕不同组织和发育早期的GmHep表达模式进行了探讨,分别构建了原核(pET-32a-GmHep)和真核(pEGFP-GmHep)表达载体,研究了GmHep的体外表达特点。结果表明:GmHep基因开放阅读框长为297bp,编码98个氨基酸,蛋白相对分子质量为10833.56,该肽N端具22个氨基酸残基的信号肽,成熟肽含有8个半胱氨酸残基、4个二硫键;氨基酸序列比对发现,GmHep与大西洋鳕Hepcidin同源性最高(93%),但与其他鱼类Hepcidin同源性较低(小于60%),预示其功能具有独特性;GmHep在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),且GmHep在5、10、30、37、40日龄仔稚鱼中均有表达(P<0.05);GmHep体外诱导表达优化条件为IPTG浓度0.01mmol/L、30℃、诱导4 h;GmHep在EPC细胞系中主要定位在细胞质中。研究表明,本研究成功构建了两种GmHep体外表达载体,确定GmHep为肝分泌型,且在太平洋鳕发育早期发挥一定作用。

达里湖瓦氏雅罗鱼5种年龄鉴定材料的比较研究下载：71 浏览：519

蔡忠璐1 段友健1 徐聚臣1 何宇1 耿介之1 刘旋1 韩牧轩1 柳玉海2 《中国水产学报》 2019年1期

摘要:

为了更准确地获得达里湖瓦氏雅罗鱼Leuciscus waleckii的年龄数据,以可判读力、吻合率和平均变异系数作为筛选指标,对达里湖瓦氏雅罗鱼5种年龄鉴定材料(耳石、鳞片、脊椎骨、鳃盖骨和匙骨等)的鉴定结果进行比较。结果表明:鳃盖骨和匙骨年龄标志不清晰或缺失,可判读力较低,而耳石、脊椎骨年轮标志清晰且在显微镜下呈明暗条纹,鳞片切线明显;综合比较分析显示,耳石的吻合率最高(86.84%),平均变异系数最低(2.22%),耳石是达里湖瓦氏雅罗鱼的最佳年龄鉴定材料,鳞片在鉴定低龄个体年龄时吻合率较高,可以作为鉴定低龄个体的辅助材料,而脊椎骨读取效果较差。研究表明,耳石和鳞片是鉴定达里湖瓦氏雅罗鱼年龄的最适材料,而脊椎骨、鳃盖骨和匙骨不适用于年龄鉴定。

高腰海胆胚胎及幼体发育过程下载：88 浏览：520

王宝锋张伟杰胡方圆郑棋元倪未黄堯常亚青《中国水产学报》 2019年5期

摘要:

为开发高腰海胆Mespilia globulus人工繁育技术,对高腰海胆进行了人工催产、授精、孵化和幼体培育,在显微镜下观察了高腰海胆从受精卵到稚胆的发育过程,并测量了受精卵、各期胚胎和幼体的大小。结果表明:利用注射KCl溶液法催产,可以顺利促使高腰海胆排放精卵,排出的精卵受精率为92.3%±1.4%;高腰海胆胚胎和幼体发育过程包括受精卵、卵裂期、囊胚期、旋转囊胚期、原肠期、棱柱幼体、二腕幼体、四腕幼体、六腕幼体、八腕幼体和稚胆等阶段;在水温为25～26℃条件下,受精卵在50min后开始卵裂,10h后进入旋转囊胚期,15h后进入原肠期,23h后进入棱柱幼体期,1d14h进入二腕幼体阶段,2d10h进入四腕幼体阶段,7d13h后进入六腕幼体阶段,9d18h后进入八腕幼体阶段,11d后变态为稚胆。研究表明,高腰海胆各期浮游幼体尺寸与其他海胆种类相近,但浮游期相对较短,人工育苗难度相对较低。

鮰爱德华菌T6SS eivpP基因缺失突变株的构建下载：87 浏览：508

郭羿杨晓宇倪萍王一婷郭思聪马红丽赵小然叶仕根《中国水产学报》 2019年3期

摘要:

为研究鮰爱德华菌Edwardsiella ictaluriⅥ型分泌系统(T6SS)EivpP与其他分泌蛋白之间的相互作用及其在细菌致病过程中的作用机制,在克隆到eivpP基因上、下游同源臂的基础上,采用融合PCR技术制备了eivpP基因缺失用的融合片段,并成功克隆到自杀质粒pDM4内,再将重组自杀质粒转化到大肠杆菌S17-1λ(pir)中,与鮰爱德华菌野生菌株ATCC33202共培养。经同源重组和蔗糖负筛获得鮰爱德华菌eivpP基因缺失突变阳性克隆,经PCR鉴定结果显示,突变株未检测出eivpP基因,即eivpP基因彻底敲除成功。本试验结果可为研究eivpP基因在鮰爱德华菌致病过程中的作用机制提供数据资料,为鮰爱德华菌弱毒疫苗的研发提供理论依据。

大头鳕TNFSF6基因的结构分析及其在发育早期和病毒暴发时的表达水平下载：87 浏览：497

刘瑞婷1 蒋洁兰1 毛明光1，2 姜志强1 布尔特1 矫志伟1 陈明康1 孙谦1 《水产研究进展》 2019年2期

摘要:

为揭示大头鳕TNFSF6基因的基本结构与功能及其在大头鳕发育和神经坏死病毒(Pacific cod nervous necrosis virus， PCNNV)暴发时的响应机制，本研究通过基因克隆获得TNFSF6 cDNA开放阅读框序列，并对序列进行生物信息学分析，运用相对荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对TNFSF6在不同组织、孵化后不同日龄仔鱼和PCNNV感染前后仔稚鱼中的表达水平进行检测。结果显示，大头鳕TNFSF6 cDNA长1 388 bp，5′UTR占315bp，3′UTR占500 bp，ORF全长573 bp，编码190个氨基酸。qRT-PCR结果显示，TNFSF6在各组织均有表达，但在脾脏和鳃组织中的表达量较高；大头鳕孵化后15、20、37和40 d TNFSF6基因的转录水平分别是其在5 d转录水平的0.28、0.15、0.12和0.13倍。在24 d和46 d PCNNV暴发时，病鱼TNFSF6基因的转录水平高于对照组；在77 d PCNNV暴发时，病鱼TNFSF6转录水平则显著低于对照组。研究表明，TNFSF6基因在大头鳕发育早期和仔鱼暴发PCNNV时发挥了重要的作用。

饲料中牛磺酸水平对红鳍东方鲀免疫及消化酶的影响下载：79 浏览：439

周婧王旭刘霞陈明康韩雨哲姜晨《中国水产学报》 2019年1期

摘要:

为研究饲料中牛磺酸水平对红鳍东方鲀Takifugu rubripes免疫功能及消化酶的影响,选用初始体质量为(32.28±0.20)g的红鳍东方鲀幼鱼,随机分为5个处理组,每组设3个重复,配制牛磺酸添加量分别为0%(T1,对照)、0.5%(T2)、1.0%(T3)、2.0%(T4)和5.0%(T5)的试验饲料,分别投喂不同的处理组,试验在15个200 L方形聚乙烯水槽中进行,养殖试验共进行56 d。结果表明:添加了不同水平牛磺酸的饲料可显著提高红鳍东方鲀肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性(P<0.05),显著降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.05),提高机体内自由基的清除能力,且在2.0%添加量时T-AOC达到峰值,而MDA含量下降到最低(P<0.05),SOD、CAT和GSH-PX在添加量为1.0%时酶活力达到峰值(P<0.05);肝脏AKP活力随饲料中牛磺酸含量的增加呈先升高后下降的趋势,在1.0%添加量时达到最大值(P<0.05),但牛磺酸对肝脏ACP活力无显著性影响(P>0.05);不同牛磺酸水平的饲料能显著提高红鳍东方鲀肠道脂肪酶活力,2.0%添加量时脂肪酶活力最高,且显著高于其他处理组(P<0.05),但牛磺酸添加量对肠道蛋白酶无显著性影响(P>0.05);1.0%、2.0%、5.0%添加量时红鳍东方鲀体表黏液溶菌酶活力显著高于对照组(P<0.05),在2.0%添加量时体表黏液溶菌酶活力达到最大值;通过对T-AOC、肠道消化酶和体表黏液溶菌酶这3个指标折线模型分析得出,红鳍东方鲀幼鱼饲料牛磺酸最适添加量为1.35～2.21 g/100 g(干饲料)。研究表明,饲料中添加牛磺酸可显著提高红鳍东方鲀的机体抗氧化及免疫能力,但过多的牛磺酸会导致抗氧化及免疫能力降低。

养殖大菱鲆红斑溃疡病病原菌的生物学特性研究下载：55 浏览：468

郭羿叶仕根王诗瑶邢震宇荆笛高东旭黎睿君刘娟《中国水产学报》 2018年6期

摘要:

为研究养殖大菱鲆Scophthalmus maximus红斑溃疡病病原菌的生物学特性,从辽宁葫芦岛地区养殖大菱鲆患病鱼的溃疡灶、肝脏、肾脏和脾脏中均分离到一株优势菌,命名为HLD01,该菌株呈乳白色,圆形,直径为(0.6±0.1)mm,表面湿润、光滑;用腹腔注射法和划伤浸泡法进行人工感染试验,这两种方法感染大菱鲆的半致死剂量分别为8.4×10～7、6.3×10～4CFU/mL,结果显示,人工感染患病大菱鲆体表出现与自然发病大菱鲆相同的溃疡灶及其他病症,表明菌株HLD01对大菱鲆有较强的致病力,可以引起养殖大菱鲆发生红斑溃疡病;生理生化鉴定结果显示,该菌与杀鲑气单胞菌无色亚种Aeromonas salmonicida subsp.achromogenes相似度最高;基于16S rDNA序列构建的系统进化树结果显示,该菌与气单胞菌属Aeromonas细菌聚为一支。综合HLD01菌株各项生物学特征,将其鉴定为杀鲑气单胞菌无色亚种,该菌对庆大霉素、卡那霉素、菌必治、恩诺沙星等药物高度敏感,可参考选取以上药物来治疗和控制养殖大菱鲆溃疡病。

养殖大菱鲆感染迟缓爱德华氏菌的分离、毒力基因及ERIC-PCR分析下载：55 浏览：526

于新然1 姚洪1 叶仕根1 黎睿君1 李华1 李强2 《中国水产学报》 2018年4期

摘要:

为了调查辽宁省葫芦岛市养殖患病大菱鲆Scophthalmus maximus病原菌感染情况,选用迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda特异性引物对分离菌株进行PCR鉴定,共分离得到22株迟缓爱德华氏菌。结果表明:迟缓爱德华氏菌毒力基因的PCR扩增显示,22株菌均含有kat B、fim A、gad B、esa V等基因;人工感染试验表明,22株迟缓爱德华氏菌感染并致大菱鲆累积死亡率均为100%;ERIC-PCR结果显示,迟缓爱德华氏菌模式菌株(ATCC15947)与分离株可分为2个基因型,分别标记为Ⅰ和Ⅱ型,其中22株迟缓爱德华氏菌分离株均为Ⅱ型,与ATCC15947菌株为Ⅰ型明显不同。本研究结果为养殖大菱鲆迟缓爱德华氏菌感染的防控提供了依据。

杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系的建立及应用下载：52 浏览：167

周贺庄子昕查荒源梁雨婷徐其征张蕊林忠乔李雅娟《中国水产学报》 2018年3期

摘要:

为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制,探寻其产业化生产的有效途径,通过对GISH的多项试验参数进行优化,建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系,并对天然四倍体泥鳅(4n=100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n=48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明:杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中,探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时,片段化后探针DNA片段长度为500～1000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为100～500bp;标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比(P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号;以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA,与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验,结果显示,来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号,无杂交信号染色体50条,来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据,也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据,对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。

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